药敏纸片
【检验方法】
1. 试验应严格遵守无菌操作， 防止微生物污染；
2. 接种物制备——直接菌落悬液法
1) 从孵育18h～24h的琼脂平板（应选用非选择性培养基如血琼脂）上挑取数个单个菌落，直接在3ml的生理盐水中制成菌悬液；
2) 调整悬液的浊度使其相当于0.5麦氏浓度[（1～2）×108CFU/mL]x b a i x i n g c o m。肉眼观察，应在足够的光线下贴靠着有黑白相间粗线条的比色卡与0.5麦氏浓度标准管进行比较。
3. 接种平板
1) M-H药敏试验琼脂平板的准备：35℃±2℃孵箱，平板正放，皿盖半开，放置约20min～30min，使其恢复至室温并使琼脂表面冷凝水干掉；
2) 调整好悬液的浊度后在15min内将无菌棉签浸入悬液内。紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体；
3) 用拭子横划线接种整个表面干燥的琼脂表面；然后再旋转平板约60?，再次用拭子横划线接种；如此两次，亦即从3个方向（60?）用棉签划线接种琼脂表面，以确保每次接种均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈；
4) 盖子可半开3min～5min，以使琼脂吸收表面多余的水分，在15min内贴完药敏试验纸片。
4. 纸片在已接种的琼脂平板上的位置
1) 将预先设定的一组抗菌药物纸片分置在已接种细菌的琼脂表面，每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触，无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备，纸片必须分布均匀，两纸片之间圆心的距离不少于24㎜来自www.xbaixing.com。90㎜的平板放置不超过5个纸片。在预期的产生小的抑菌环的纸片（例如：庆大霉素或万古霉素）旁边放置产生大的抑菌环的纸片（如头孢菌素类）以避免重叠区。注意纸片距离琼脂边缘的距离同样重要，无论有多少纸片，如果纸片放置得太靠近琼脂的边缘（≥10㎜），一些药物的抑菌环可能会不完整，由于一些药物几乎是瞬间扩散的，一旦纸片与琼脂表面接触，就不能再移动，如位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片；
2) 在放置好纸片后15min内倒置琼脂板并将它放置在（35℃±2℃）的孵箱中。
5. 平板的判断
1) 经过16h～18h的孵育后，检查每个平板原文www.xbaixing.com。如果平板的涂布令人满意，接种正确，由此产生的抑制圈是均匀的圆形，并会有融合生长的菌苔。如果可见单个菌落，说明接种量过稀，必须重复试验。测量完全抑制区的直径（由肉眼来判断），包括纸片的直径。测量抑菌环至接近的整毫米数，采用游标卡尺或尺子在培养板的背面测量小百姓网。将培养板放在一个黑色不反光的背景上并用反射的光照射，但下列情况除外：
a. 如果测试苯唑西林、头孢西丁、甲氧西林或奈夫西林对葡萄球菌的敏感性，孵育时间必须达到24h，才能提交敏感性的报告；其他的药物可以在孵育16h～18h 后读取结果并报告。用透射光（平板举向光源）来检查苯唑西林在明显抑菌环内有无耐药菌落的少量生长。抑制圈内任何区域出现可辨别的生长都判为苯唑西林耐药；
b. 如果检测万古霉素对金黄色葡萄球菌或肠球菌属的敏感性, 孵育时间必须达到24h，才能报告其敏感性。其它药物可以孵育16h～18h 后读取结果并报告x_b_a_i_x_i_n_g_c_o_m。对万古霉素检测的纸片扩散法不推荐用于凝固酶阴性的葡萄球菌。
2) 没有肉眼可见的明显的生长区即可认为抑制圈边缘。 在抑菌环边缘的只能在放大镜下观察到的微小菌落的生长可以忽略不计。
a. 含甲氧苄啶和磺胺类药物测试中，培养基中含有的某些拮抗剂可能会导致轻微的生长；因此，忽略少量生长（20%或更少的边缘生长），并测量比较明显的边缘，以确定抑菌环的直径小.百.姓.网。
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